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1. テンプレートの準備
シークエンシング反応のための高品質のシークエンシングテンプレートが必要です。PCR後の dNTPs、プライマー、およびDNAポリメラーゼを除去するには、PCRテンプレートを精製またはクリーンアップする必要があります。
⇒サンガーシークエンス用テンプレート調製試薬へ
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ADS PCR Cleaning Beads： PCR テンプレートから磁気ビーズ精製により不純物を除去 |
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ADS Exo-Alp PCR Cleaning Mix： ExoSAP-ITTM PCR Product Cleanup Reagent（他社製品）の代替品 |
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ADS Phi29 RCA DNA amplification Kit：
ローリングサイクル増幅用の phi29 DNA ポリメラーゼ、増幅ミックス、溶解バッファーが付属 |
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2. サイクルシークエンシング反応
シークエンシング反応では、サンガーのジデオキシ鎖終結法を使用して、変性、アニーリング、増幅のサイクルでDNAテンプレートを線形増幅します。この反応では、4種類の蛍光標識ジデオキシヌクレオチド（deATP、ddTTP、ddCTP、およびddGTP）がターミネーターとして追加され、DNAフラグメントの合成において対応するdNTPと競合します。DNA合成の伸長は、対応する通常のdNTPの代わりにddNTPが組み込まれると停止します。
⇒サイクルシークエンシング反応試薬へ
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SuperDye Cycle Sequencing Kit：
BigDyeTM Kits（他社製品）の代替品であり、サイクルシークエンスに必要な試薬が付属 |
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SuperDye dGTP Cycle Sequencing Kit：
dGTP BigDyeTM（他社製品）の代替品であり、Gリッチやヘアピンループ等を有する場合に最適 |
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ADS 5x Sequencing Reaction Buffer： SuperDye サイクルシークエンスキットに付属するバッファー |
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ADS SuperDye Enhancer： シークエンスシグナル増強試薬 |
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3. 反応後のクリーンアップ
サイクルシークエンシング反応後のクリーンアップは、余剰の ddNTP、dNTP、プライマー、および酵素を反応後の混合物から除去するために実行されます。これらの汚染物質が存在すると、シークエンスの読み取り品質が低下する可能性が高くなります。
⇒反応後のクリーンアップ試薬へ
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ADS Sequencing Reaction Cleaning Beads： SuperDyeTM および BigDyeTM から得られた産物の精製用磁気ビーズ |
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SuperDye XT Purification Kit： 攪拌と遠心ステップのみで SuperDyeTM および BigDye から得られた産物を精製 |
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4. サンプルローディングとキャピラリー電気泳動
クリーンアップが完了後、キャピラリー電気泳動（CE）にロードする準備が整います。DNA フラグメントは、分離マトリックスとしてポリマーを使用して
CE で分離されるため、使用するシークエンサーに対応するポリマーが必要となります。キャピラリーアレイを通過した後、蛍光シグナルが検出されることにより各塩基のピークが得られます。
⇒サンプルローディングとキャピラリー電気泳動へ
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PwPOP Polymers： 他社製品の代替品であり、ABI シークエンサーと互換性のある高品質の CE ポリマー |
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Refill Running buffer for AB 3500： AB3500 Genetic Analyzer 用詰め替えランニングバッファー |
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ADS 10xCE Running Buffer： ABI3500 シリーズ以外の ABI Genetic Analyzer 用ランニングバッファー |
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TruPure Formamide： シークエンス、およびフラグメント解析の希釈液のために特別に開発された高度に脱イオン化されたホルムアミド |
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5. キャピラリーアレイ再生
複数回シークエンスを実行した後、ポリマー沈着物とタンパク質汚染物質がキャピラリーアレイ表面に蓄積し、キャピラリーアレイのパフォーマンスを低下させ、シークエンス品質を危険にさらす可能性があるため、クリーニングする必要があります。汚染物質の付着を取り除くためのクリーニングを行わないと、アレイを早期に交換する必要が発生し、コストが大幅に増加します。
⇒キャピラリーアレイ再生用試薬へ
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ADS Capillary Regeneration Kit： ABI シークエンサー 3130、3730、3500 のキャピラリーアレイを再生および洗浄するための試薬 |
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