1. |
SubXTM は、生理学的条件下(例:生物学的液体中で直接)で、高い親和性でDNAに結合します。そして、DNA-SubXTM 複合体を固相マトリックスに吸着させます。SubXTM は、リン酸基を介してDNAを捕捉するため、AT/GC含量やDNAフラグメント長に関連するバイアスを排除でき、抽出効率とダウンストリームアプリケーションの精度の向上が可能です。また、DNA捕捉にカオトロピック塩を必要としないため、出発物質(および
cfDNA)の希釈は不要です。 |
2. |
SubXTM は、DNA-タンパク質ヌクレオソーム複合体からヒストンやその他のDNA結合タンパク質を分離・抽出が可能なため、プロテイナーゼKを使用せず、高タンパク質溶液でDNAを捕捉します。 |
3. |
SubXTM 分子の両端には、リン脂質クラスター結合基があります。それにより、SubXTM の各分子が2つのエクソソームを固定することができます(二量体化)。また、いくつかの SubXTM 分子が単一のエクソソームに結合できるため、これによりさらにオリゴマー化が起こります。 |
4. |
SubXTM は、タンパク質性の高い生体液(血清、血漿)と高塩分生体液(尿、涙など)のどちらでもエクソソームをオリゴマー化します。溶液中の SubXTM分子が過剰になると、最大10~20個のエクソソームがオリゴマー化して、14K x g の短い遠心分離ステップで簡単に沈殿するミクロンサイズの粒子が形成されます。特別に設計されたバッファーにより、ペレット化されたエクソソームを、下流のアプリケーションに適した遊離モノマーフォーマットに再構成できます。 |
5. |
SubXTM との親和性の程度が異なるため(DNA:強、エクソソームリン脂質複合体:穏やか)、ペレット全体からエクソソームと cfDNA を分離可能です。エクソソームは、特殊な低塩再構成バッファーによって、モノマーフォーマットで簡単に回収できますが、緊密に結合した
SubXTM -cfDNA-ビーズ複合体はペレットに残るため、cfDNA は特別な溶液によって分離されます。 |
6. |
SubXTM は、遊離リン酸化タンパク質およびリン脂質またはその水性ミセルに結合しません(すなわち、膜に統合されません)。
SubXTM の添加は、ミセルの凝集を引き起こさず、代わりに凝集体が解離して、2~3 nm の粒子に戻ります。 |