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GeneXP 社製品
ウイルス粒子濃縮キット
エクソソーム単離キット
ローリングサークル増幅(RCA)キット
ウイルス粒子濃縮キット / 細胞培養培地用エクソソーム単離キット / ヒト尿用エクソソーム単離キット / 母乳用エクソソーム単離キット / その他生体液用エクソソーム単離キット / ローリングサークル増幅(RCA)について / PicoPhi RCA キット / FemtoPhiTM RCA キット / U-Clone マスターミックスキット

GeneXP社(アメリカ)は、細胞外小胞の研究に関するエクソソーム分離キットやローリングサークル増幅(RCA)キットなど、独自の製品をラインナップしています。エクソソーム分離キットは、最短10分、インキュベーションなし、低速遠心機で分離が可能です。RCAキットは、短いDNAまたはRNAプライマーの存在下で、Phi29 DNA ポリメラーゼベースのローリングサークルメカニズムによって、環状またはゲノムDNAを増幅します。この増幅法は、PCRベースの増幅よりも優れています。


ウイルス粒子濃縮キット


細胞培養液、細胞ライセート、体液など幅広い液体サンプルから、任意スケールで迅速かつ簡便、高効率にウイルス粒子を濃縮・精製するためのキットです。本製品の性能は、組換えレトロウイルス、レンチウイルス、rAAV、EBV、HAV、HBV、HCV、ロタウイルスなどで実証されています。濃縮したウイルスは、in vivo 実験、in vivo 動物試験にも使用可能です。

【製品特長】
・短時間でウイルス粒子を濃縮可能(30分未満)
・簡便な操作(低速遠心 3.000xg、インキュベーション不要)
・高効率(回収率 95%以上、純度 95%以上)
・最大 100 倍まで濃縮可能
・低エンドトキシンレベル
・ほぼすべての天然および組換えウイルス粒子に対応

【ワークフロー】


【保管温度】
 4-8℃

【製品特長】
 ・迅速:20分
 ・効率的:>95%の収量
 ・簡便
 ・最大100倍濃縮
 ・ほとんどすべての天然および組み換えウイルス粒子に適合

製品名 サイズ 税別価格 カタログ# データシート
Univarsal Viral Particle Concentration kit 50反応分 お問合せ Vir50


細胞培養培地用エクソソーム単離キット

この製品は、エクソソームの密度(1.1~1.21g/ml)に基づいてエクソソームを単離する製品です。
細胞培養上清が様々な密度のマトリックスと混合されると、エクソソームの密度は他の様々な密度の分子や粒子から分離され、15分間の低速遠心分離(2,500g)後に下相にとどまります。この方法は、PEGベースの方法とは完全に異なります。この方法を使用した純度と収量は、PEGベースの方法や超遠心分離を使用した場合よりも優れています。
本製品は、最大 50ml の細胞培養培地の処理に適しています。

【ワークフロー】


【保管温度】
 4℃

【キット内容物】 ※最大細胞培養培地 50ml までの処理に適しています。
 ・バッファーP1 25ml
 ・バッファーP2 25ml
 ・バッファーD 0.5ml
 ・バッファーF 0.5ml

製品名 サイズ 税別価格 カタログ# データシート
Exosome Isolation kit from Cell culture Media 1キット お問合せ ExoCC50


ヒト尿用エクソソーム単離キット

尿は非侵襲滴に大量採取できることから、エクソソームを利用したバイオマーカー研究に有望なサンプルとして注目されています。
しかし、尿中には Tamm-Horsfall タンパク質(THP)が形成するゲル構造が存在し、多くのエクソソームがその中に捕捉されるため、従来法では回収効率の低下が課題となっています。

本キットは、独自の ME Buffer により THP ゲルに捕捉されたエクソソームを効率的に放出しながら、エクソソームおよび細胞の完全性を維持します。その後、密度ベースの ExoEZ
TM 技術により、30分以内で尿由来エクソソームを迅速に濃縮・回収できます。

従来の DTT や CHAPS を用いた処理とは異なり、エクソソーム構造へのダメージを抑制し、高品質なサンプル調製を実現します。回収したエクソソームは、タンパク質解析、RNA解析、miRNA解析など、様々な下流アプリケーションにご利用頂けます。

本製品は、最大 50ml までの尿の処理に適しています。


▲尿中における細胞外小胞(EV)およびmiRNAの分布
  【ワークフロー】


製品名 サイズ 税別価格 カタログ# データシート
Exosome Isolation kit from Urine 1キット お問合せ Exo-UT50


母乳用エクソソーム単離キット

母乳は、栄養源であるだけでなく、免疫調節機能をもつ生物学的に重要な成分の細胞やナノ粒子も含んでいます。母乳を1時間以上室温またはより低温で不適切に保管をすると、母乳細胞のアポトーシスと細胞死が起こり、自然に存在するエクソソームのプールが汚染されます。母乳からのエクソソームの単離は、脂肪球(MFG)、カゼインミセル、細胞および細胞片など様々な存在によりさらに複雑になります。タンパク質とリン脂質で覆われたMFGは、サイズと密度がほぼ不均一な一種の小胞です。細胞と細胞片、カゼインミセル、MFGを効率的に除去すると、分離されたエクソソームの品質と収量が大幅に向上します。

本製品は、最大 50ml の母乳の処理に適しています。

製品名 サイズ 税別価格 カタログ# データシート
Exosome Isolation kit from Breast Milk 1キット お問合せ Exo-BM50


その他生体液用エクソソーム単離キット

脳脊髄液(CSF)、唾液、鼻汁、気管支肺胞洗浄液(BAL)、羊水などの多様な生体液からエクソソームを分離できます。これらの試料には、細胞や大型べシクル、タンパク質などが含まれるため、解析精度を高めるには抽出前の適切な前処理が重要です。高品質なエクソソーム回収により、各種バイオマーカー研究をサポートします。

本製品は、最大 25ml または 50ml の生体液の処理に適しています。
一部のサンプルでは、PBS での希釈が必要です。(PBS はキットに含まれません。)

製品名 サイズ 税別価格 カタログ# データシート
Exosome Isolation kit from Other Biofluids 1キット お問合せ Exo-BF25


ローリングサークル増幅(RCA)について
さらに、二本鎖核酸中の一本鎖 DNA に強く結合する能力があり、二本鎖 DNA を枝分かれ構造から解離させることで、多重置換増幅(MDA: Multiple Displacement Amplification)に適しています。
RCA 技術は、Phi29 ポリメラーゼの高いプロセシビティ(連続合成能)と校正活性を有するため、DNA 増幅において PCR ベースの手法より優れています。特にゲノム DNA を増幅する場合、RCA は PCR 法と比較して、より大きな断片(10 kb 以上)を生成し、より良好なカバレッジとより少ない増幅バイアスを実現します。
RCA 技術は非常にシンプルかつ強力で汎用性が高いため、DNA クローニング、シークエンシング、SNP および STR ジェノタイピング、ゲノム DNA 増幅などに広く使用されています。増幅された DNA は数十から数千のタンデムリピートを含むコンカテマー(線状多量体)のため、設計した環状テンプレートを利用することで、DNA オリガミ、ナノチューブ、ナノリボンの様な複雑な繊細な DNA ナノ構造の生成にも用いられます。


▲RCA 反応の模式図
ランダムヘキサマープライマーが環状一本鎖 DNA の複数箇所にアニーリングし、Phi29 DNA ポリメラーゼが高忠実度で DNA を伸長します。反応が進行すると、Phi29 は新たに合成された DNA 上でも伸長を続け、DNA を少なくとも 1,000 倍以上増幅します。


PicoPhi RCA キット

環状DNAを迅速に増幅するために開発され、30℃で4時間以内にピコグラム以下からマイクログラム量にDNAが増幅されます。本キットは特にDNAクローニングやダイレクトDNAシークエンスに適しています。


  ▲競合GのPhi29 酵素と PicoPhi 酵素の純度と活性の比較
  (A)ランダムDNAプライマー  (B)ランダムRNAプライマー

上記プライマーとそれぞれの図中に表記された量の変性 pUC19 を混合しました。
30℃で4時間反応させた後、反応が停止し、アガロースゲルにロードしました。
PicoPhi は、15kb 増幅産物の強度が pUC19 のインプット量によく反応しましたが、競合 G の強度はあまり差がありませんでした。また、競合 G では pUC19 のインプットがない場合でも増幅物が生成されました。これは外来 DNA で汚染されていることを示しています。

【製品ラインアップ】
製品名 サイズ 税別価格 カタログ# データシート
PicoPhi DNA Amplification (RCA) Kit with Random Primers
*ランダムプライマーを用いて、微量 DNA を網羅的に増幅する RCA キットです。1 ピコグラムのテンプレート DNA を検出可能です。
100反応分 お問合せ Phi100
PicoPhi RCA Kit with Specific Primers
*お手持ちの特異的プライマーを用いて、特定配列を増幅する RCA キットです。
100反応分 お問合せ Phi100S
PicoPhi RCA Premix with Random Primers
*プレミックスタイプの RCA キットです。ランダムプライマーを用いて、微量 DNA を網羅的に増幅します。
100反応分 お問合せ PM100
PicoPhi RCA Premix with Specific Primers
*プレミックスタイプの RCA キットです。お手持ちの特異的プライマーを用いて、特定配列を増幅します。
100反応分 お問合せ PM100S


FemtoPhiTM RCA キット

従来の RCA では増幅産物のおよそ 20% が既知の生物配列データベースにマッピングできない DNA であることが知られています。 特にシングルセル由来ゲノム DNA や 10pg 未満の極微量 DNA を増幅する場合、この非特異的増幅 DNA が全増幅産物の 50% 以上を占めることがあります。この非特異的 DNA の存在はデータ解析の正確性を低下させ、下流解析に重大な影響を与えます。 これらの非特異的産物は、プライマーダイマー形成部位で生じる誤プライミングに由来すると考えられています。 そこで、ランダムプライマー使用時の非特異的増幅を避けるために、Phi29 ポリメラーゼの C 末端ドメインにタンパク質工学的アプローチを行いました。この特許出願中の改変型 Phi29 ポリメラーゼは、非特異的 DNA 増幅を大幅に減少させ、野生型 Phi29 の 1000 倍の感度を示しました。本酵素はシングルセルゲノム DNA や臨床・環境サンプル中の極低濃度 DNA の特異的増幅に理想的な酵素です。

PicoPhi DNA 増幅キットと FemtoPhi DNA 増幅キットの効率と特異性の比較

変性 qPCT-eGFP(コピー数表示)をそれぞれ対応する反応バッファーおよび酵素(PicoPhi:上段、FemtoPhi:下段)と混合しました。30℃ で 4 時間後に反応を停止し、EcoR1 で消化し、アガロースゲルにロードしました。
・赤矢印:目的増幅産物
・緑矢印:非特異的増幅産物
・白矢印:未使用プライマーおよび非特異的プライマー

PicoPhi では非特異的プライマーが、DNA 増幅に利用され、スメア状バンドが観察されました。
FemtoPhi では最小 10 コピー(約 0.1 フェムトグラム)のプラスミド DNA を検出できましたが、PicoPhi では 105 コピー(約 1 ピコグラム)が検出限界でした。
PCRによる検出可能な最低コピー数

既知コピー数のプラスミドを PCR にかけ、PCR 産物をアガロースゲルにロードしました。PCR によって検出されたプラスミドの最低コピー数は約 100 コピーでした。

【製品ラインアップ】
製品名 サイズ 税別価格 カタログ# データシート
FemtoPhi RCA Kit with Random Primers
*ランダムプライマーを用いて、微量 DNA を網羅的に増幅する RCA キットです。最小 1 フェムトグラムのテンプレート DNA を検出可能です。
100反応分 お問合せ FP100
FemtoPhi RCA Kit wtih Specific Primers
*お手持ちの特異的プライマーを用いて、特定配列を増幅する RCA キットです。
100反応分 お問合せ FP100S
FemtoPhi RCA Premix Kit with Random Primers
*プレミックス対応の RCA キットです。ランダムプライマーを用いて、微量 DNA を網羅的に増幅します。
100反応分 お問合せ FM100
FemtoPhi RCA Premix Kit with Specific Primers
*プレミックス対応の RCA キットです。お手持ちの特異的プライマーを用いて、特定配列を増幅します。
100反応分 お問合せ FM100S


U-Clone マスターミックスキット

U-Clone Master Mix は、相同配列を利用した DNA クローニングおよび変異導入用のオールインワン試薬です。制限酵素やライゲーション工程を簡略化し、最短 15 分で目的 DNA を組み立てることができます。単一断片から複数断片のアセンブリまで対応し、点変異、挿入、欠失変異の導入にも利用可能です。遺伝子クローニングや発現ベクター構築の効率化に貢献します。

【特長】
・わずか 15 分でシームレスクローニングが可能
・任意の DNA 断片を任意のベクター部位へ挿入可能
・単一断片および複数断片の同時クローニングに対応
・点変異、挿入変異、欠失変異の導入に対応
・アダプター、リンカー、タグ配列の付加が容易
・DNA ライゲースや脱リン酸化処理が不要
・少数のコロニー解析で目的クローンを取得可能

製品名 サイズ 税別価格 カタログ# データシート
U-Clone Master Mix Kit 100反応分 お問合せ UC100

【お問合せ】
試薬機器部
Phone 052-624-4388

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