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Evomic Science社製品
唾液用ウイルス濃縮キット
エクソソーム単離キット
ローリングサークル増幅(RCA)キット
唾液用ウイルス濃縮キット / 細胞培養培地用エクソソーム単離キット / ヒト尿用エクソソーム単離キット / 母乳用エクソソーム単離キット / ローリングサークル増幅(RCA)について / SuperPhi RCA キット / FemtoPhiTM RCA プレミックスキット

Evomic Science社(アメリカ)は、細胞外小胞の研究に関するエクソソーム分離キットやローリングサークル増幅(RCA)キットなど、独自の製品をラインナップしています。エクソソーム分離キットは、最短10分、インキュベーションなし、低速遠心機で分離が可能です。RCAキットは、短いDNAまたはRNAプライマーの存在下で、Phi29 DNA ポリメラーゼベースのローリングサークルメカニズムによって、環状またはゲノムDNAを増幅します。この増幅法は、PCRベースの増幅よりも優れています。


唾液用ウイルス濃縮キット


コットンスワブを鼻腔の奥まで押し込むと良いサンプルが得られますが、これは患者にとって優しい方法ではありません。
鼻腔スワブサンプルのばらつきは、新型コロナウイルスRNA検出の偽陰性の結果の主な原因です。
鼻腔と同様に唾液中にもウイルス粒子が存在することを指し示すエビデンスが増えてきています。さらに重要なのは、唾液のサンプリングは、鼻腔スワブサンプルよりも侵襲性が低く、変動が少なく、大量のサンプルを収集しやすく、医療従事者は非常に安全です。
そのため唾液用のウイルス濃縮キットが開発されました。すべての呼吸器系ウイルスは、深く咳をしてから口全体をすすぐことによって、最大限に収集され、ウイルス粒子をあらゆるサンプル量で最大100倍まで効率的に濃縮します。
濃縮されたウイルス粒子は、RNAと抗原の両方の検出に適しており、検出感度が向上しています。
別の in vitro および in vivo アプリケーションにも適しており、このキットはプールされた唾液サンプルのウイルス検出に特に適しています。


【ワークフロー】


【保管温度】
 4-8℃

【製品特長】
 ・迅速:20分
 ・効率的:>95%の収量
 ・簡便
 ・最大100倍濃縮
 ・ほとんどすべての天然および組み換えウイルス粒子に適合

【価格】
製品名 サイズ 税別価格 カタログ# データシート
Viral Concentration kit for Saliva and other biofluids 10反応分 ¥67,000 SC10


細胞培養培地用エクソソーム単離キット


この製品は、エクソソームの密度(1.1~1.21g/ml)に基づいてエクソソームを単離する製品です。
細胞培養上清が様々な密度のマトリックスと混合されると、エクソソームの密度は他の様々な密度の分子や粒子から分離され、15分間の低速遠心分離(2,500g)後に下相にとどまります。この方法は、PEGベースの方法とは完全に異なります。この方法を使用した純度と収量は、PEGベースの方法や超遠心分離を使用した場合よりも優れています。

【ワークフロー】


【保管温度】
 4℃

【キット内容物】 ※最大細胞培養培地 50ml までの処理に適しています。
 ・バッファーP1 25ml
 ・バッファーP2 25ml
 ・バッファーD 0.5ml
 ・バッファーF 0.5ml

【価格】
製品名 サイズ 税別価格 カタログ# データシート
Exosome Isolation kit for cell culture 1キット ¥67,000 ExoCC50


ヒト尿用エクソソーム単離キット


尿は、バイオマーカー測定用に大量に、非侵襲的に簡単に採取できるサンプルです。尿中に最も豊富に含まれるタンパク質の1つであるタム・ホースフォールタンパク質(THP)は、尿中のエクソソームの分離を阻害する主な原因です。THP分子は、モノタンパク質分子としてだけではなく、重合したミクロンの長いフィブリルとしても存在します。これらの線状フィブリルはさらに、大量のエクソソームを閉じ込める三次元ゲルを形成します。古典的な尿アッセイでは、総尿中エクソソームの約40%が含まれるTHPゲルは廃棄されますが、THPゲルに捉えられたエクソソームを効率的に放出するためのMEバッファーが開発されました。
  【ワークフロー】


【保管温度】
 4℃

【キット内容物】 ※最大50mlまでの尿の処理に適しています。
 ・バッファーME
 ・バッファーP1
 ・バッファーP2
 ・バッファーD
 ・バッファーF

【価格】
製品名 サイズ 税別価格 カタログ# データシート
Exosome Isolation kit for human urine 1キット ¥88,000 ExoUT50


母乳用エクソソーム単離キット


母乳は、営業源であるだけでなく、免疫調節機能をもつ生物学的に重要な成分の細胞やナノ粒子も含んでいます。母乳を1時間以上室温またはより低温で不適切に保管をすると、母乳細胞のアポトーシスと細胞死が起こり、自然に存在するエクソソームのプールが汚染されます。母乳からのエクソソームの単離は、脂肪球(MFG)、カゼインミセル、細胞および細胞片など様々な存在によりさらに複雑になります。タンパク質とリン脂質で覆われたMFGは、サイズと密度がほぼ不均一な一種の小胞です。細胞と細胞片、カゼインミセル、MFGを効率的に除去すると、分離されたエクソソームの品質と収量が大幅に向上します。

【保管温度】
 4~8℃

【キット内容物】 ※最大50mlまでの母乳の処理に適しています。
 ・試薬P1
 ・試薬P2
 ・試薬D
 ・試薬F

【価格】
製品名 サイズ 税別価格 カタログ# データシート
Exosome Isolation kit for breast milk 1キット ¥67,000 ExoBM50


ローリングサークル増幅(RCA)について



ローリングサークル増幅(RCA)は、等温酵素プロセスで、短いDNAまたはRNAプライマーの存在下で、Phi29 DNA ポリメラーゼベースのローリングサークルメカニズムによって、環状またはゲノムDNAを増幅します。
Phi29 DNA ポリメラーゼは、DNA合成用のC末端DNAポリメラーゼドメインとプルーフリーディング活性用の3’-5’エキソヌクレアーゼ活性を持つ空間的に分離されたN末端ドメインの2つの機能ドメインを持つ単量体タンパク質です。二本鎖核酸の一本鎖DNAに強く結合する能力があり、高い処理能力とプルーフリーディング活性でPCRベースの増幅よりも優れています。
特にゲノムDNAが増幅された場合、RCAはPCRベースのアプローチよりもカバレッジがよく、増幅バイアスが少ない大きなフラグメント(10kb以上)を生成します。RCAテクノロジーは、非常にシンプルかつ強力で用途が広いため、DNAクローニング、シークエンシング、SNPおよびSTRジェノタイピング、ゲノムDNA増幅などに広く使用されています。増幅されたDNAは数十から数千のタンデムリピートを含むコンカテマー(線状多量体)のため、RCAテクノロジーは円形のテーラーデザインテンプレートを操作することにより、DNAオリガミ、ナノチューブ、ナノリボンの様な複雑な繊細なDNAナノ構造の生成にも用いられます。


SuperPhi RCA キット


環状DNAを迅速に増幅するために開発され、30℃で4時間以内にピコグラム以下からマイクログラム量にDNAが増幅されます。本キットは特にDNAクローニングやダイレクトDNAシークエンスに適しています。


  ▲競合GのPhi酵素とSuperPhi酵素の純度と活性の比較
  (A)ランダムDNAプライマー  (B)ランダムRNAプライマー

上記プライマーとそれぞれの図中に表記された量の変性pUC19を混合しました。
30℃で4時間後に反応を止め、アガロースゲルにロードしました。
SuperPhiは、15kb増幅産物の強度がpUC19のインプット量によく反応しましたが、競合Gの強度はあまり差がありませんでした。また、競合GではpUC19のインプットがない場合でも増幅物が生成されました。これは外来DNAで汚染されていることを示しています。

【キット内容物】
- SuperPhi RCA Premix kit (random primer)
(品番:PM100)
SuperPhi RCA Premix kit (specific primer)
(品番:PM100S)
サンプルバッファー
SuperPhiプレミックス -
反応プレミックスSC -

【価格】
製品名 サイズ 税別価格 カタログ# データシート
SuperPhi RCA Premix kit (random primer) 100反応分 ¥104,000 PM100
SuperPhi RCA Premix kit (specific primer) 100反応分 ¥104,000 PM100S


FemtoPhiTM RCA プレミックスキット


本製品は、非特異的増幅を避けるために、Phi29 ポリメラーゼのC末端ドメインにタンパク質工学的アプローチを行いました。この特許出願中のPhi29 ポリメラーゼは、非特異的DNA増幅を大幅に減少させ、野生型Phi29の1000倍の感度があります。環状DNA/RNA検出やシングルセルゲノム増幅に適しています。

SuperPhi DNA 増幅キットと FemtoPhi DNA 増幅キットの効率と特異性の比較
記載された量の変性 qPCT-eGFP(コピー数)をそれぞれ対応する反応バッファーおよび酵素を混合しました。30℃で4時間後に反応を停止し、EcoR1で消化し、アガロースゲルにロードしました。赤い矢印は予想される産物を示し、緑色矢印は非特異的増幅サンプルを示しています。白い矢印も非特異的増幅を示します。これはFemtoPhiでは見られましたが、SuperPhiでは見られませんでした。
FemtoPhiキットで検出可能なプラスミドの最小コピー数は、10コピー(~0.1フェムトグラム)でした。一方、SuperPhiキットでは、10
5コピー(~1ピコグラム)でした。
PCRによる検出可能な最低コピー数
記載された量のプラスミドをPCRにかけ、PCR産物をアガロースゲルにロードしました。PCRによって検出されたプラスミドの最低コピー数は約100でした。

【キット内容物】
- FemtoPhi RCA Premix kit (random primer)
(品番:FM100)
FemtoPhi RCA Premix kit (specific primer)
(品番:FM100S)
サンプルバッファー
2×FemtoPhi プレミックス -
反応プレミックスSF -

【価格】
製品名 サイズ 税別価格 カタログ# データシート
FemtoPhi RCA Premix kit (random primer) 100反応分 ¥109,000 FM100
FemtoPhi RCA Premix kit (specific primer) 100反応分 ¥109,000 FM100S

お問い合わせ 試薬部: biosupport@filgen.jp P.052-624-4388 https://filgen.jp/
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