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Home製品・サービス情報試薬・材料・消耗品>RealSeq Biosciences社製品 miRNA NGSライブラリー調製キット

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RealSeq Biosciences社製品
miRNA NGS ライブラリー調製キット
RealSeq®の特長 / RealSeq®-AC / Real-Seq®-Biofluids / Real-Seq® Size Select Beads / RealSeq®-AC Index Primers

RealSeq®は、次世代シークエンス(NGS)解析用のsmall-RNAライブラリーを調整する段階におけるバイアスを最小限に抑える独自の技術です。この技術は、多くのmiRNAの検出不足につながる、シークエンスライブラリー調整時のアダプターライゲーションによるバイアスの問題を解決します。本キットと他社製品を用いてライブラリー調製を行い、シークエンス結果を比較したバイアスに関する文献も掲載されています。(参考文献:Decreasing miRNA sequencing bias using a single adapter and circularization approach

RealSeq®の特長


smallRNAシークエンスライブラリーを調整する過程におけるほとんどのバイアスは、2つのアダプターをmiRNAs/smallRNAの3'および5'末端に接続するライゲーション反応の配列依存性の変動に起因します。単一アダプターとの環状化ライゲーション法を用いることにより、RealSeq®はライブラリー調製時のバイアスを大幅に減少させます。

empty adapter/adapter dimer をほとんど形成しないため、1ngの低いトータルRNAでライブラリーをゲルフリーで精製することが可能であり、ライブラリー間のシークエンス結果の再現性が向上
miRNAシークエンスバイアスを大幅に削減し、生体サンプル中の多種多様なmiRNAおよびその他の低分子RNAの検出が可能
検出の精度が高いため、堅牢なmiRNAの定量が可能

(クリックすると拡大)

右図は、1pmoleのmiRXPloreユニバーサルリファレンスプール(Miltenyi Biotec)を使用して、6つの異なる市販のライブラリー調製キットのバイアスを比較した結果。
RealSeq®-ACは、他のキットよりもバイアスが大幅に低く、71.8%を正確に定量化している。

(クリックすると拡大)

RealSeq®-AC miRNA Library Kit for Illumina® sequencing


◆キット内容
試薬 チューブキャップカラー 保存温度
RNA Buffer(RB) Blue -20℃
RealSeq® Adapter(A) Blue -20℃
RNase Inhibitor(RI) Blue -20℃
Ligation Buffer(LB) Blue -20℃
Ligase(L) Blue -20℃
Blocking Agent(BA) Orange -20℃
Blocking Enzyme(BE) Orange -20℃
Blocking Buffer(BB) Orange -20℃
RealSeq® Enzyme(RSE) Green -20℃
RealSeq® Buffer(RSB) Green -20℃
RT Primer(RTP) Red -20℃
dNTPs(dNTP) Red -20℃
RT Buffer(RTB) Red -20℃
RT Enzyme(RTE) Red -20℃
PCR Buffer Yellow -20℃
PCR Polymerase Yellow -20℃
Dimer Removal Agent(DRA) - -20℃
Adapter Dilution Buffer(AD) - -20℃
miRNA Control(+) - -20℃
RNase-Free Water(W) - -20℃
Forward Primer(FP) - -20℃
Reverse Primers, Index 1(RP-12/24/48) - -20℃
RealSeq® Beads(B) - 4℃

◆その他準備しておくもの
・ヌクレアーゼフリーPCRチューブ
・ヌクレアーゼフリー1.5mlチューブ
・PCRチューブ用のマグネットスタンド
・96ウェルアルミニウムブロック
・RealSeq® Size Select Beads(カタログ番号 510-00012/510-00024/510-00048)
・96-100%エタノール(分子生物学グレード)
・Bioanalyzer® DNA 1000キットまたは、Tape Station D1000 DNAキット
・Qubit® フルオロメーターおよびQubit® dsDNA HS アッセイキット、100アッセイ

◆ワークフロー


◆参考資料
RealSeq®-AC製品マニュアル

◆価格
製品名 容量 税別定価 Cat.#
RealSeq®-AC miRNA Library Kit for Illumina® sequencing 12 rxns お問合せ 500-00012
48 rxns お問合せ 500-00048


RealSeq®-Biofluids Plasma/Serum miRNA Library Kit for Illumina® sequencing


RealSeq®-Biofluids は、RealSeq®-AC の精度を活用し、血漿などの生体液中の cf-miRNA を対象としたゲルフリーのプロトコルで正確かつ高感度な定量が可能です。
右図:
3つの異なるライブラリー調製キットを使用した血漿miRNAのプロファイリングの結果。200μLの血漿サンプルを使用して、RNAを抽出。シークエンスカバレッジを正規化するために、1キットあたり1000万リードをサブサンプリングしています。

本キットを使用することで、他の2つのライブラリー調製キットを使用した時よりも短いまたはマップできないリード(オレンジ)の割合を大幅に減らします。このことにより、シークエンスされたmiRNAおよびその他の低分子RNAの数は大幅に多くなります。

(クリックすると拡大)
右図:
各ライブラリー調製キットの異なるカバレッジで検出されたmiRNAの数を示しています。

本キットを使用した場合、はるかに多くのmiRNAのシークエンスが可能であり、特にコピー数の少ないmiRNAでは顕著です。

(クリックすると拡大)

◆キット内容

試薬 チューブキャップカラー 保存温度
RNA Buffer(RB) Blue -20℃
RealSeq® Adapter(A) Blue -20℃
RNase Inhibitor(RI) Blue -20℃
Ligation Buffer(LB) Blue -20℃
Ligase(L) Blue -20℃
Blocking Agent(BA) Orange -20℃
Blocking Enzyme(BE) Orange -20℃
RealSeq® Enzyme(RSE) Green -20℃
RealSeq® Buffer(RSB) Green -20℃
RT Primer(RTP) Pink -20℃
dNTPs(dNTP) Pink -20℃
RT Buffer(RTB) Pink -20℃
RT Enzyme(RTE) Pink -20℃
PCR Buffer Yellow -20℃
PCR Polymerase Yellow -20℃
Dimer Removal Agent(DRA) - -20℃
HY4 Removal Agent(HY) - -20℃
miRNA Control(+) - -20℃
RNase-Free Water(W) - -20℃
Forward Primer(FP) - -20℃
Reverse Primers, Index(RP1-12/24/48) - -20℃
Reverse Primers, Index 25-48(RP25-48) - -20℃
RealSeq® Beads(B) - 4℃
SPRI Beads(SPRI) - 4℃

◆その他準備しておくもの
・ヌクレアーゼフリーのPCRチューブ
・ヌクレアーゼフリーの1.5mlチューブ
・PCRチューブ用のマグネットスタンド
・96ウェルアルミニウムブロック
・96-100%エタノール(分子生物学グレード)
・Bioanalyzer® DNA 1000 キットまたは、Tape Station D1000 DNA キット
・Qubit® フルオロメーターおよびQubit® dsDNA HS アッセイキット、100アッセイ

◆ワークフロー



◆参考資料
製品データシート
RealSeq®-Biofluids 製品マニュアル

◆価格
製品名 容量 税別定価 Cat.#
RealSeq®-Biofluids Plasma/Serum miRNA Library Kit for Illumina® sequencing 12 rxns お問合せ 600-00012
48 rxns お問合せ 600-00048


RealSeq®-Size Select Beads
本製品は、アダプターダイマーを取り除くためのサイズ選択ビーズです。

◆価格
製品名 容量 税別定価 Cat.#
RealSeq® Size Select Beads 12 rxns お問合せ 510-00024
48 rxns お問合せ 510-00048


RealSeq®-AC Index Primers

本製品は、RealSeq®キットに含まれるプライマーに加えて、オプションのインデックスプライマーです。

◆価格
製品名 Index 税別定価 Cat.#
RealSeq®-AC Index Primers 1-12 お問合せ 501-00024
13-24 お問合せ 502-00024
25-36 お問合せ 503-00024
37-48 お問合せ 504-00024

お問い合わせ 試薬部: biosupport@filgen.jp P.052-624-4388 https://filgen.jp/
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