製品・サービス情報
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RealSeq Biosciences社製品
miRNA NGS ライブラリー調製キット |
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RealSeq® は、次世代シークエンス(NGS)解析用の small-RNA ライブラリーの調製時バイアスを最小限に抑える独自の技術です。この技術は、多くの
miRNA の検出不足につながる、ライブラリー調製時のバイアスの問題を解決します。本キットと他社製品を用いてライブラリー調製を行い、シークエンス結果のバイアスを比較した文献をはじめとする、多数の文献がございます。 |
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RealSeq®の特長
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Small-RNA シークエンスライブラリーを調整する過程におけるほとんどのバイアスは、アダプターを miRNA/small-RNA の 3'
および 5' 末端に接続することに起因します。RealSeq® は、単一アダプターとの環状化ライゲーション法を用いた独自の技術であり、ライブラリー調整時のバイアスを大幅に減少させます。
<特長>
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ライブラリー調製時のバイアスが大幅に減少 |
・ |
empty adapter/adapter dimer をほとんど形成しない |
・ |
液体生検サンプルからRNAライブラリーをゲルフリーで調整することが可能 |
・ |
多種多様なmiRNA、その他の低分子RNAの検出が可能 |
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堅牢なmiRNAの定量が可能 |
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◆5つの異なる市販のライブラリー調整キットとバイアスを比較した結果
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右図は、1pmoleのmiRXPloreユニバーサルリファレンスプール(Miltenyi Biotec)を使用して、6つの異なる市販のライブラリー調製キットのバイアスを比較した結果。
RealSeq®-ACは、他のキットよりもバイアスが大幅に低く、71.8%を正確に定量化している。 |
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細胞、組織サンプル由来の miRNA ライブラリー調整キット
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本キットを用いることで、細胞や組織中のmiRNAサンプル(1ng-1000ng total RNA input)から最低限のバイアスで Illumina
社の次世代シークエンサーに対応したライブラリーを調整可能です。
◆キット内容
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試薬 |
チューブキャップカラー |
保存温度 |
RNA Buffer(RB) |
Blue |
-20℃ |
RealSeq® Adapter(A) |
Blue |
-20℃ |
RNase Inhibitor(RI) |
Blue |
-20℃ |
Ligation Buffer(LB) |
Blue |
-20℃ |
Ligase(L) |
Blue |
-20℃ |
Blocking Agent(BA) |
Orange |
-20℃ |
Blocking Enzyme(BE) |
Orange |
-20℃ |
Blocking Buffer(BB) |
Orange |
-20℃ |
RealSeq® Enzyme(RSE) |
Green |
-20℃ |
RealSeq® Buffer(RSB) |
Green |
-20℃ |
RT Primer(RTP) |
Red |
-20℃ |
dNTPs(dNTP) |
Red |
-20℃ |
RT Buffer(RTB) |
Red |
-20℃ |
RT Enzyme(RTE) |
Red |
-20℃ |
PCR Buffer |
Yellow |
-20℃ |
PCR Polymerase |
Yellow |
-20℃ |
Dimer Removal Agent(DRA) |
- |
-20℃ |
Adapter Dilution Buffer(AD) |
- |
-20℃ |
miRNA Control(+) |
- |
-20℃ |
RNase-Free Water(W) |
- |
-20℃ |
Forward Primer(FP) |
- |
-20℃ |
Reverse Primers, Index 1(RP-12/24/48) |
- |
-20℃ |
RealSeq® Beads(B) |
- |
4℃ |
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◆その他準備しておくもの
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・ヌクレアーゼフリーPCRチューブ
・ヌクレアーゼフリー1.5mlチューブ
・PCRチューブ用のマグネットスタンド
・96ウェルアルミニウムブロック
・RealSeq® Size Select Beads(カタログ番号 510-00012/510-00024/510-00048)*
・96-100%エタノール(分子生物学グレード)
・Bioanalyzer® DNA 1000キットまたは、Tape Station D1000 DNAキット
・Qubit® フルオロメーターおよびQubit® dsDNA HS アッセイキット、100アッセイ
*AMPure XP 磁気ビーズで代用していただけます。 |
◆ワークフロー

◆参考資料
◆価格
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製品名 |
容量 |
税別定価 |
Cat.# |
RealSeq®-AC miRNA Library Kit for Illumina® sequencing |
12 rxns |
お問合せ |
500-00012 |
48 rxns |
お問合せ |
500-00048 |
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液体生検サンプル由来の cf-miRNA ライブラリー調製キット
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血漿などの生体液中の cf-miRNA サンプルから最低限のバイアスで、Illumina社の次世代シークエンサーに対応したライブラリーを調整する様設計されています。わずか
50μL の血漿から得られるRNAをサンプルとして用いて、ゲルフリーのプロトコルにより、高感度で精度の高い解析が可能です。
◆3つの異なるライブラリー調整キットを使用した血漿miRNAのプロファイリングの結果
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共通の血漿サンプルを使用して、3つの異なるライブラリー調製キットでシークエンスライブラリーを準備しました。すべてのヒトmiRNAを含むデータベース(miRBase)を使用してアラインされ、アラインされないリードは、さらにヒトゲノムデータベース(hg19)にアラインしました。本キットを使用することで参照配列にマッピングされるmiRNAおよびその他の低分子RNAの割合は大幅に多くなります。 |
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◆異なるライブラリー調製キットによる血漿miRNAの検出
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健康なドナーからの200μLの血漿サンプルを使用して、3つの異なるライブラリー調製キットでシークエンスライブラリーを準備しました。シークエンシングカバレッジを正規化するために、リードは1,000万リードにサブサンプリングされました。シークエンシングリードは、miRBase
21 データベースにアラインされました。本キットを使用した場合、はるかに多い種類のmiRNAのシークエンスが可能であり、特にコピー数の少ないmiRNAでは顕著です(A)。また、サンプルを支配するmiRNAの割合からバイアスが少ない解析を本キットが可能にすることがわかります(B)。
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(クリックすると拡大) |
◆キット内容
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試薬 |
チューブキャップカラー |
保存温度 |
RNA Buffer(RB) |
Blue |
-20℃ |
RealSeq® Adapter(A) |
Blue |
-20℃ |
RNase Inhibitor(RI) |
Blue |
-20℃ |
Ligation Buffer(LB) |
Blue |
-20℃ |
Ligase(L) |
Blue |
-20℃ |
Blocking Agent(BA) |
Orange |
-20℃ |
Blocking Enzyme(BE) |
Orange |
-20℃ |
RealSeq® Enzyme(RSE) |
Green |
-20℃ |
RealSeq® Buffer(RSB) |
Green |
-20℃ |
RT Primer(RTP) |
Pink |
-20℃ |
dNTPs(dNTP) |
Pink |
-20℃ |
RT Buffer(RTB) |
Pink |
-20℃ |
RT Enzyme(RTE) |
Pink |
-20℃ |
PCR Buffer |
Yellow |
-20℃ |
PCR Polymerase |
Yellow |
-20℃ |
Dimer Removal Agent(DRA) |
- |
-20℃ |
HY4 Removal Agent(HY) |
- |
-20℃ |
miRNA Control(+) |
- |
-20℃ |
RNase-Free Water(W) |
- |
-20℃ |
Forward Primer(FP) |
- |
-20℃ |
Reverse Primers, Index(RP1-12/24/48) |
- |
-20℃ |
Reverse Primers, Index 25-48(RP25-48) |
- |
-20℃ |
RealSeq® Beads(B) |
- |
4℃ |
SPRI Beads(SPRI) |
- |
4℃ |
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◆その他準備しておくもの
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・ヌクレアーゼフリーのPCRチューブ
・ヌクレアーゼフリーの1.5mlチューブ
・PCRチューブ用のマグネットスタンド
・96ウェルアルミニウムブロック
・96-100%エタノール(分子生物学グレード)
・Bioanalyzer® DNA 1000 キットまたは、Tape Station D1000 DNA キット
・Qubit® フルオロメーターおよびQubit® dsDNA HS アッセイキット、100アッセイ |
◆ワークフロー

◆参考資料
◆価格
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製品名 |
容量 |
税別定価 |
Cat.# |
RealSeq®-Biofluids Plasma/Serum miRNA Library Kit
for Illumina® sequencing |
12 rxns |
お問合せ |
600-00012 |
48 rxns |
お問合せ |
600-00048 |
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参考文献
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1. |
Liu,
X. et al. A pro-metastatic tRNA fragment drives Nucleolin oligomerization and
stabilization of bound metabolic mRNAs. Mol Cell. 2022 Jul
21;82(14):2604-2617.e8. doi: 10.1016/j.molcel.2022.05.008. Epub 2022 Jun 1. |
2. |
Hacquard, T. et al. The Arabidopsis F-box protein FBW2 targets AGO1 for
degradation to prevent spurious loading of illegitimate small RNA. Cell Rep.
2022 Apr 12;39(2):110671.doi:10.1016/j.celrep.2022.110671. |
3. |
Karimi, H.Z. et al. Arabidopsis apoplastic fluid contains sRNA- and circular
RNA–protein complexes that are located outside extracellular vesicles,
The Plant Cell, Volume 34, Issue 5, May 2022, Pages 1863–1881, https://doi.org/10.1093/plcell/koac043 |
4. |
Carro Vázquez, D. et al.
Effect of Anti-Osteoporotic Treatments on Circulating and Bone MicroRNA
Patterns in Osteopenic ZDF Rats. International Journal of Molecular Sciences
23, 6534 (2022). |
5. |
Zhou, X. et al. (2022), 24-nt phasiRNAs move from tapetal to meiotic cells
in maize anthers. New Phytol, 235: 488-501. https://doi.org/10.1111/nph.18167 |
6. |
Vázquez-Villaseñor, I. et al.
RNA-Seq Profiling of Neutrophil-Derived Microvesicles in Alzheimer’s
Disease Patients Identifies a miRNA Signature That May Impact Blood-Brain
Barrier Integrity. International Journal of Molecular Sciences 23, 5913 (2022). |
7. |
Lattekivi, F. et al.
Profiling Blood Serum Extracellular Vesicles in Plaque Psoriasis and Psoriatic
Arthritis Patients Reveals Potential Disease Biomarkers. Int J Mol Sci 23,
doi:10.3390/ijms23074005 (2022). |
8. |
Ravishankar, P., and Daily A., Tears as the Next Diagnostic Biofluid: A
Comparative Study between Ocular Fluid and Blood. Applied Sciences, 2022,
12(6), 2884; https://doi.org/10.3390/app12062884 |
9. |
Gutmann, C., et al., Association of cardiometabolic microRNAs with COVID-19
severity and mortality. Cardiovascular Research, Volume 118, Issue 2, February
2022, Pages 461–474, https://doi.org/10.1093/cvr/cvab338 |
10. |
Androvic, P., et al., Small
RNA-Sequencing for Analysis of Circulating miRNAs: Benchmark Study. J Mol
Diagn. 2022 Jan 23;S1525-1578(22)00011-3. doi: 10.1016/j.jmoldx.2021.12.006. |
RealSeq®-Size Select Beads
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本製品は、アダプターダイマーを取り除くためのサイズ選択ビーズです。 |
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◆価格
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製品名 |
容量 |
税別定価 |
Cat.# |
RealSeq® Size Select Beads |
12 rxns |
お問合せ |
510-00024 |
48 rxns |
お問合せ |
510-00048 |
※ライブラリー調製キットと同時購入時の価格です。 |
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RealSeq®-AC Index Primers
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本製品は、RealSeq®キットに含まれるプライマーに加えて、オプションのインデックスプライマーです。
◆価格
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製品名 |
Index |
税別定価 |
Cat.# |
RealSeq®-AC Index Primers |
1-12 |
お問合せ |
501-00024 |
13-24 |
お問合せ |
502-00024 |
25-36 |
お問合せ |
503-00024 |
37-48 |
お問合せ |
504-00024 |
※ライブラリー調製キットと同時購入時の価格です。 |
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