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RealSeq Biosciences社製品
miRNA NGS ライブラリー調製キット
miRNA NGS ライブラリー調製キット / 選択的 RNA 除去プローブ カスタム作製サービス / インデックスプライマー

RealSeq® は、次世代シークエンス(NGS)解析用の small-RNA ライブラリーの調製時バイアスを最小限に抑える独自の技術です。この技術は、多くの miRNA の検出不足につながる、ライブラリー調製時のバイアスの問題を解決します。本キットと他社製品を用いてライブラリー調製を行い、シークエンス結果のバイアスを比較した文献をはじめとする、多数の文献がございます。また、本キットと組み合わせてご使用いただける選択的 RNA 除去プローブにより、不要な特定の RNA 配列を除去することで、重要な miRNA シークエンスを強化し、コストの削減を実現することが可能です。

チラシダウンロード
miRNA NGS ライブラリー調製キット

Small-RNA シークエンスライブラリーの調整におけるバイアスの多くは、アダプターを miRNA/small-RNA の 3' および 5' 末端に接続することに起因します。独自の RealSeq® テクノロジーは、単一アダプターとの環状化ライゲーション法を用いることにより、多くの miRNA の検出不足の原因となるライブラリー調整時のバイアスを大幅に軽減することが可能です。

<特長>
ライブラリー調製時のバイアスを大幅に軽減
Empty adapter/Adapter dimer を大きく抑制
少量の RNA ライブラリーをゲルフリーで調整することが可能
多種多様な miRNA、その他の低分子 RNA の検出が可能
堅牢な miRNA の定量が可能

<RealSeq® ワークフロー>

<他社製ライブラリー調製キットとのバイアス比較>

右図は、1 pmole の miRXPlore ユニバーサルリファレンスプール(Miltenyi Biotec)を使用して、5つの異なる市販のライブラリー調製キットのバイアスを比較した結果です。本キットを使用した場合、他のキットよりもバイアスが大幅に低く、サンプル中の miRNA を 71.8%正確に定量できます。他社キットとのシークエンスバイアスを比較した文献は他にも多数ありますので、下記よりご確認ください。

(クリックすると拡大)

感度、解析結果の一貫性、バイアスの観点で最も高いパフォーマンス(本キットと他社 3 製品を用いた比較)
1. 感度、解析結果の一貫性、バイアスの観点で、最も高いパフォーマンス(本キットと他社 3 製品を用いた比較)
Khamina, K. et al. A MicroRNA Next-Generation-Sequencing Discovery Assay (miND) for Genome-Scale Analysis and Absolute Quantitation of Circulating MicroRNA Biomarkers. Int. J. Mol. Sci. 2022, 23, 1226. https://doi.org/10.3390/ijms23031226
2. 環状化ライゲーション法以外のライゲーションを用いた調整法では高いバイアス(4 つの原理の 10 製品を用いた比較)
Herbert ZT. et al. Multisite Evaluation of Next-Generation Methods for Small RNA Quantification. J Biomol Tech. 2020 Jul;31(2):47-56. doi: 10.7171/jbt.20-3102-001
3. ライブラリー調整時のバイアスを低減し、低分子RNAの高精度検出、定量可能(本キットと他社 5 製品を用いた比較)
Barberán-Soler S. et al. Decreasing miRNA sequencing bias using a single adapter and circularization approach. Genome Biol. 2018;19(1):105. Published 2018 Sep 3. doi:10.1186/s13059-018-1488-z

<製品ラインアップ>

細胞、組織由来サンプル用と液体生検由来サンプル用の 2 つの仕様のキットをラインアップしています。

◆RealSeq®-AC miRNA Library Kit(細胞、組織由来サンプル用)
細胞や組織中の miRNA サンプル(1ng-1000ng total RNA input)から最低限のバイアスで illumina 社の次世代シークエンサーに対応したライブラリーを調製可能です。

◆RealSeq®-Biofluids Plasma/Serum miRNA Library Kit(血漿などの液体生検由来サンプル用)
血漿などの生体液中の cf-miRNA サンプルから最低限のバイアスで、illumina 社の次世代シークエンサーに対応したライブラリーを調製する様に設計されています。わずか、50μL の血漿から得られる RNA をサンプルとして用いて、ゲルフリーのプロトコルにより、高感度で精度の高い解析が可能です。

アプリケーションノート(PDFダウンロード)
 50μL の血漿からゲルフリーのプロトコルにより取得した細胞外低分子 RNA プロファイリング

◆RealSeq®-Dual miRNA Library Kit(ライブラリーへのデュアルインデックスの組み込みが可能)
細胞や組織中の miRNA サンプルを使用して、デュアルインデックスを組み込んだライブラリーの調製が可能です。

<価格>

製品名 容量 税別定価 品番 マニュアル
RealSeq®-AC miRNA Library Kit
(細胞、組織由来サンプル用)
12 反応分 ¥280,000 500-00012
48 反応分 ¥883,000 500-00048
RealSeq®-Biofluids Plasma/Serum miRNA Library Kit
(血漿などの液体生検由来サンプル用)
12 反応分 ¥290,000 600-00012
48 反応分 ¥894,000 600-00048
RealSeq®-Dual miRNA Library Kit
(ライブラリーへのデュアルインデックスの組み込みが可能)
12 反応分 ¥335,000 700-00012
48 反応分 ¥978,000 700-00048

<参考文献>
1. Liu, X. et al. A pro-metastatic tRNA fragment drives Nucleolin oligomerization and stabilization of bound metabolic mRNAs. Mol Cell. 2022 Jul 21;82(14):2604-2617.e8. doi: 10.1016/j.molcel.2022.05.008. Epub 2022 Jun 1.
2. Hacquard, T. et al. The Arabidopsis F-box protein FBW2 targets AGO1 for degradation to prevent spurious loading of illegitimate small RNA. Cell Rep. 2022 Apr 12;39(2):110671.doi:10.1016/j.celrep.2022.110671.
3. Karimi, H.Z. et al. Arabidopsis apoplastic fluid contains sRNA- and circular RNA–protein complexes that are located outside extracellular vesicles, The Plant Cell, Volume 34, Issue 5, May 2022, Pages 1863–1881, https://doi.org/10.1093/plcell/koac043
4. Carro Vázquez, D. et al. Effect of Anti-Osteoporotic Treatments on Circulating and Bone MicroRNA Patterns in Osteopenic ZDF Rats. International Journal of Molecular Sciences 23, 6534 (2022).
5. Zhou, X. et al. (2022), 24-nt phasiRNAs move from tapetal to meiotic cells in maize anthers. New Phytol, 235: 488-501. https://doi.org/10.1111/nph.18167
6. Vázquez-Villaseñor, I. et al. RNA-Seq Profiling of Neutrophil-Derived Microvesicles in Alzheimer’s Disease Patients Identifies a miRNA Signature That May Impact Blood-Brain Barrier Integrity. International Journal of Molecular Sciences 23, 5913 (2022).
7. Lattekivi, F. et al. Profiling Blood Serum Extracellular Vesicles in Plaque Psoriasis and Psoriatic Arthritis Patients Reveals Potential Disease Biomarkers. Int J Mol Sci 23, doi:10.3390/ijms23074005 (2022).
8. Ravishankar, P.., and Daily A.., Tears as the Next Diagnostic Biofluid: A Comparative Study between Ocular Fluid and Blood. Applied Sciences, 2022, 12(6), 2884; https://doi.org/10.3390/app12062884
9. Gutmann, C., et al., Association of cardiometabolic microRNAs with COVID-19 severity and mortality. Cardiovascular Research, Volume 118, Issue 2, February 2022, Pages 461–474, https://doi.org/10.1093/cvr/cvab338
10. Androvic, P., et al., Small RNA-Sequencing for Analysis of Circulating miRNAs: Benchmark Study. J Mol Diagn. 2022 Jan 23;S1525-1578(22)00011-3. doi: 10.1016/j.jmoldx.2021.12.006.
 ⇒参考文献リスト(メーカーサイト)


選択的 RNA 除去プローブ カスタム作製サービス

発現量の多い RNA の存在は、発現量がそれより少ない RNA シークエンス深度を低下させます。RealSeq Bioscience 社は、RNA サンプルから過度に豊富な RNA を選択的に除去するための Selective Suppression Probe (SSPTM) を開発しました。SSPTM により特定の RNA を選択的に除去することが可能なため、標的 miRNA のリード数が増加し、シークエンス深度が向上します。SSPTM パネルのカスタム作製をご希望の場合は、除去希望の RNA 配列リストとともに、弊社の試薬機器部()までお問合せください。

<ご使用方法>
RealSeq 社提供のライブラリー調製キット RealSeq® シリーズのプロトコルに組み合わせてご使用頂けます。
ステップ1 のアダプターライゲーション時に SSPTM パネルを 1 μL添加していただくのみのため、非常に簡便にご使用可能です。


SSPTM は過剰な RNA 配列(赤)を削減し、より多くのシークエンスリソースを標的 RNA 配列(緑)に割り当てることが可能です。

SSPTM は、RNA サンプルから高発現 RNA を除去し、miRNA のシークエンスを強化します。左図は、ヒト血漿から精製された Total RNA を用いたトリプリケートのシークエンス結果です。本解析の NGS ライブラリーは、RealSeq-AC を使用して調製されました。

SSP
TM を使用した結果では、不要な rRNA のリード数を総リード数の約 0.1% に削減し、miRNA のリード数を約 50% 増加させることができました。このため、RealSeq の SSPTM とライブラリー調製キットを組み合わせることで、重要な miRNA のシークエンスを強化し、大幅なコスト削減を実現することが可能です。

<製品リスト>

製品名 品番 参考 CoA
Selective Suppression Probes- SSPTM Custom Panel 800-00000 [PDF]
※除去希望の RNA 配列リストとともに、弊社の試薬機器部()までお問合せください。


インデックスプライマー

本製品は、RealSeq®キットに含まれるプライマーに加えて、オプションのインデックスプライマーです。

◆価格
製品名 Index 税別定価 Cat.#
RealSeq®-AC Index Primers 1-12 お問合せ 501-00024
13-24 お問合せ 502-00024
25-36 お問合せ 503-00024
37-48 お問合せ 504-00024
※ライブラリー調製キットと同時購入時の価格です。

【お問合せ】
試薬機器部
Phone 052-624-4388

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