製品情報・受託サービス情報 What's New!　製品・サービス情報　ダウンロード　e-mail_news登録　　　　 会社情報 概要　ミッション　アクセス　リクルート　連絡先　ビジネスパートナー　ライセンス　個人情報保護方針 Home＞製品・サービス情報＞受託サービス＞3D 組織イメージング受託解析 製品・サービス情報 　　 受託サービス サービス別ラインナップ ・3D 組織イメージング受託解析 　　 科学機器 製品別ラインナップ メーカー別ラインナップ 　　 試薬・材料・消耗品 製品別ラインナップ メーカー別ラインナップ ・ 組織透明化試薬 　　 ソフトウェア 製品別ラインナップ メーカー別ラインナップ LifeCanvas社 顕微鏡イメージング 3D 組織イメージング受託解析サービス 本サービスは、ガラススライド上の薄片組織から顕微鏡観察を行う従来法に依存することなく、独自の手法を用いることで、組織を 3 次元的にとらえ、組織の空間イメージング解析を行うことができます。従来の技術と比較して、組織の微小環境の空間的および形態学的な分析を詳細かつ高精度に実施することが可能です。 　概要 現在の組織分析において主流となっている 2 次元による切片組織の分析手法は、組織の微小環境について空間的に解析を行う場合や、形態学的な分析はかなり限られた情報しか得られません。また、従来法では何百ものスライドを処理しなくてはならないことや、複雑な生物学的プロセスを理解する上で、組織を少量しかサンプリングできない場合など、様々な問題点がありました。 本サービスは、これらの問題点を解決するため、LifeCanvas 社独自の CLARITY 法を利用した組織透明化技術とサンプル処理法を組み合わせて 3D 空間イメージングを実施することができます。 特長1 - SHIELD（組織保存法） LifeCanvas 社で独自に開発された SHIELD 法*1は、生物学的組織の標準的な PFA 固定を補完および強化する組織保存技術です。エポキシド分子が組織内に拡散し架橋することで、物理的および化学的なストレス要因から、内因性蛍光分子やタンパク質、核酸および、全体的な組織構造を固定し、強固な骨格が形成されます。この SHIELD の組織保存法は複数回の蛍光タンパク質および抗体標識によるイメージング解析に影響なく保護することが可能です。 *1. Protection of tissue physicochemical properties using polyfunctional crosslinkers. Nature Biotechnology (2019) 37: 73-83 特長2 - Clear＋（組織透明化） CLARITY テクノロジー（Clear Lipid-exchanged Acrylamide-hybridized Rigid Imaging / Immunostaining / in situ-hybridization-compatible TissuehYdrogel）は、2013年に Nature に掲載された論文で初めて公開された技術*2です。組織に含まれる脂質は、顕微鏡解析時に光を散乱してしまい、画質が不明瞭になる原因となっています。そのため、光学的な顕微鏡解析において、脂質による不透明度を解決することが解析結果を左右するカギとなります。 LifeCanvas 社ではこの技術を利用した透明化技術である「Clear＋」システム*3 を開発し、サンプルの形態や構造的な影響を最小限に抑えてサンプルを脱脂し、光学的に透明化することで、機械的な強度や分子の安定性、三次元構造を保持したまま解析を行うことが可能です。 *2. Structural and molecular interrogation of intact biological systems. Nature (2013) 497: 332-337. *3. CLARITY for mapping the nervous system. Nature Methods (2013) 10: 508-513. 特長3 - SWITCH（抗体標識制御） SWITCH 法は大きな動物やヒトの組織サンプルの処理中に生じる様々な化学反応を効率的に制御するためのシステム*4です。この技術は主に 2 つの手順からなり、化学物質とバッファーが組織全体を自由に拡散できる状態にすることで、化学反応を抑制させるステップ（SWITCH-OFF）と、バッファー環境を化学反応が可能な状態まで急激に変化させるステップ（SWITCH-ON）を切り替えることで、組織表面から内部構造へ均一な免疫染色を行うことができる上、構造や生体分子、抗原性などを保持した状態を維持することが可能なため、多重化イメージングのために 20 回程度までの再標識を可能にしています。 *4. Simple, Scalable Proteomic Imaging for High-Dimensional Profiling of Intact Systems. Cell (2015) 163(6): 1500-1514. 特長4 - Stochastic electrotransport（分子輸送） 確率的電気輸送（Stochastic electrotransport; SE）は、多孔質サンプルを迅速かつインタクトに組織サンプルを処理することができる LifeCanvas 社の特許技術*5 です。脱脂や免疫染色などの処理工程は、従来、マウスの脳組織など大きなサンプルをインタクトに処理する場合、抗体を組織表面から内部へ浸透させ標識させるのに時間がかかる場合が多く、制限がありましたが、この SE 法は回転電場を使用することで、組織内の帯電した構造に損傷を与えることなく、多孔質サンプル全体に電気移動性の高い分子（抗体や界面活性剤ミセルなど）を拡散させることが可能です。これによって大きなサイズの組織サンプルも短時間で効率的に脱脂でき、核やタンパク質の染色、および抗体染色において高い均一性を実現しています。上記の SWITCH 法と組み合わせることで iDISCO 法や CUBIC 法よりも短時間な均一性を実現しています。 *5. Stochastic electrotransport selectively enhances the transport of highly electromobile molecules. PNAS (2015) 112 (46): E6274-E6283 特長5 - eFLASH（組織免疫染色） 短時間で組織サンプルを均一に染色することができる高速組織標識技術が eFLASH*6 です。この方法は上記の SE 法と抗体の結合親和性の反応条件の調節を組み合わせることで、組織サンプルの表面で飽和することなく組織内部まで浸透させ、均一な染色を実現しています。はじめは、高 pH と高デオキシコール酸ナトリウム（Sodium Deoxycholate；NaDC）濃度により、抗体の結合が妨げられていますが、実験中に、pH と NADC 濃度を徐々に低下させていくことで抗体の親和性が徐々に高まり、最終的に pH は中和され、NADC 濃度が低くなることで、抗体がサンプル全体に均一に結合します。 *6. Ultrafast immunostaining of organ-scale tissues for scalable proteomic phenotyping. bioRxiv (2019) 特長6 - SmartAnalytics（3D データ解析） 独自のソフトウェアである SmartAnalytics を利用し、SmartSPIM ライトシート顕微鏡（LifeCanvas社製）から取得したテラバイトサイズの 3D イメージングデータから解析を行うことが可能です。マウスの脳組織において取得した 3D イメージングデータについて、データベースとなる Allen Brain Atlas への正確に位置合わせを行うことで、非常に粒度の細かい脳領域の正確な細胞数と蛍光強度の局在を解析できるため、複数サンプルを処理することで統計的優位性試験を実現し、ヒートマップを作成することが可能です。 　解析のワークフロー 本サービスは、以下の手順で解析を実施いたします。本サービスは、サンプル処理からデータ解析までフルパッケージのサービスとなっております。なお、解析で使用されている製品は、全て LifeCanvas 社が独自に開発、製造、特許取得した製品を使用しています。 これらの製品は購入も可能です。　⇒製品のご購入はコチラ 【ご提供データについて】 ご依頼頂いた解析内容によってデータ容量が大きく異なる場合があります。データ容量に合わせて CD/DVD、USB メモリー、HDD またはCloud などの電子媒体を使用して納品いたします。主なご提供データは以下の通りです。 1. 生画像データ（.tiff スタック形式） 2. 実験条件や解析条件などの作業内容を含めたレポート（解析内容により Powerpoint あるいは Word 形式にて作成） 3. サンプルの染色およびイメージング深度を定性的に視覚化するためのビデオとスナップショット（ご希望の場合のみ） 4. この他、ご希望に応じて画像処理されたファイルを作成いたします。 　解析のアプリケーション 本サービスでは、解析のアプリケーションとして c-Fos による神経活動マッピング、アミロイドβ定性化、内因性蛍光マッピングの 3 タイプをご用意しています。その他、カスタムでのイメージング解析も可能ですが、カスタムの場合は生物種や組織タイプの種類などにより、ご対応できる場合とできない場合がございます。詳しくは弊社までお問合せください。 1. c-Fos による神経活動マッピング 本アプリケーションでは、最適化されたツールとプロトコルを使用して、中枢神経系（CNS）全体の c-FOS+細胞ラベルを付けて画像化します。c-FOS は、前初期遺伝子発現に由来するタンパク質であり、哺乳類の脳全体の神経活動の特異的マーカーとして知られており、様々な摂動（薬物治療、外部刺激など）により発現レベルが上昇します。免疫染色、イメージングおよび画像解析を用いることで、組織全体の c-FOS+細胞を検出し、脳全体の神経活動を視覚化、マッピングおよび定量化します。LifeCanvas 社では、中枢神経系全体でこれらの細胞を標識し画像化する技術を確立しています。また、マウス脳サンプルで陽性細胞を検出するための効果的な提案が可能で、細胞数や密度、Allen Brain Atlas に登録された局所神経活動レベルを提供かするヒートマップを提供いたします。 2. アミロイドβマッピング 脳内の異常なタンパク質凝集体の沈着は、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病などの主要な神経変性疾患の特徴として知られています。本アプリケーションでは、βアミロイド沈着（アルツハイマー病など）におけるサンプル処理と解析を実施することが可能です。病気の脳実質への局所的な損傷は、多くの場合、反応性グリア（星状細胞、ミクログリアなど）の活性化などの神経炎症反応を伴います。LifeCanvas 社では、アストロサイト（GFAP+）とミクログリア（IBA1+）のマッピングを通じてこれらの応答を評価することができます。 3. 内因性蛍光マッピング アデノ随伴ウイルス（AAV）を介した遺伝子導入は、がんから稀な遺伝性疾患まで、多くの疾患に対する有望な治療アプローチです。LifeCanvas 社は、内因性蛍光タンパク質を利用し、3D 組織学、イメージング、および分析のための高度なツールを使用することで、偏りのない生体内分布データを生成し、インタクトな組織全体での AAV 導入を評価します。本アプリケーションでは、優れたシグナル保存により、ウイルスによって導入された遺伝子によって発現された蛍光タンパク質（GFP、tdTomato、YFPなど）の高感度検出が可能です。 　サンプル条件 本解析では、以下の方法でご準備頂いたサンプルの解析が可能です。条件を満たさないサンプルの場合は、解析できない場合がございますので、ご注意ください。また、以下に記載のない組織タイプなどの場合は、事前にご相談ください。 受入れ可能な生物種 マウス、ラット サンプルサイズ寸法 軸方法（高さ）に最大 12mm、横方向に 40mm x 60mm 対応サンプルタイプ ・脳 その他の臓器は解析内容によりご対応できる場合とできない場合がございます。 詳しくは弊社までお問合せください。 固定方法および 保存方法 ご提供サンプルは、必ず以下の固定方法を実施したものでご準備ください。 ・ 4％パラホルムアルデヒド（PFA）で 4℃、24 時間インキュベート ・ PFA以外の固定方法は使用しないでください。 ・ サンプルはご発送前に 4℃、PBS+NaN3（0.02％）に保管してご準備ください。 ※50mL チューブの上部まで充填した状態でご送付ください。キャップをパラフィルムで密封してください。 良好なデータを取得するため、ヘパリンを利用した灌流固定を推奨しております（残留血液は自家蛍光性で、特に一次抗体が同じ宿主生物に由来する場合、非特異的な抗体染色を引き起こす可能性があります）。 【推奨する灌流固定プロトコル】 1. 液体が透明になるまで、10 U/mL ヘパリンを含む氷冷 1x PBS で、げっ歯類を経心腔的灌流し、続いて氷冷 4％ PFA を流す。 2. 脳または選択したサンプルを採取し、4％ PFA 溶液中で、4℃ で 24時間、穏やかに振盪しながらインキュベートする。 3. サンプルをPBSで 2 回洗浄し、発送前に 0.02％ アジ化ナトリウムを含む PBS にサンプルを保存する。 サンプル採取時の 注意事項 ご提出いただくサンプルに切り傷や亀裂が含まれている場合、サンプル処理中に伝播する可能性があります。これらの切り傷、亀裂等は抗体を引っかける窪み（シンク）として機能し、非特異的なシグナルを生じさせる要因となる場合があります。また、物理的な変形や損傷は、Allen Brain Atlas への適切な位置合わせを妨げる可能性があります。 灌流は、組織表面に見える血管に赤みがなく、組織内部に閉じ込められた気泡がなく、高品質であることが重要です。不完全な灌流は、血管の自家蛍光と非特異的染色（特にマウスホスト抗体の場合）につながる可能性があります。 サンプル送付時の 注意事項 サンプルに内因性蛍光マーカー（GFP、mCherry、tdTomato など）が含まれている場合は、サンプルチューブをアルミホイルで包み、遮光してください。 いずれの解析に使用する組織サンプルも凍結禁止です。必ず 4℃ 輸送でご発送ください。 　価格 解析する組織の種類やその画像解析の内容によって料金が異なります。 サービス名 アプリケーション 税別価格 品番 3D 組織イメージング解析サービス c-Fos による神経活動マッピング お問合せ F-LCT-3DFOS-［サンプル数］ アミロイドβマッピング F-LCT-3DAMB-［サンプル数］ 内因性蛍光マッピング F-LCT-3DEFM-［サンプル数］ 　ご注意事項（必ずご確認ください。） 1. 解析サービスに関して 本サービスの解析は、弊社の海外提携先（LifeCanvas Technologies社）にて実施されます。本サービスで取得されたデータのご利用は、研究用途に限定されています。ヒト、動物への医療・臨床診断用には使用しない様にご注意ください。 2.  サンプルの送付および取扱いに関して 2.1 サンプルのご発送は、必ず、上述のサンプル条件に記載されている「サンプル送付時の注意事項」に従ってご準備ください。ご送付の際は、チューブをパラフィルムで覆い、キャップの緩みや中身の漏れがおきない様にしてください。サンプルの入ったチューブには、油性マジックでサンプル名を明記し、ビニールバッグ等に入れてください。RNAサンプルは、十分量の保冷剤を同梱の上、冷蔵宅急便にてご送付ください。 2.2 サンプルは、なるべく休日をはさまない様に、弊社営業時間内（土日祝祭日を除く、平日9時～18時）に到着する様にご発送ください。なお、弊社までの送料につきましては、荷送り様負担とさせて頂いたおりますので、あらかじめご了承ください。 2.3 サンプル送付の際は、受託解析サービスQCシートおよび免責事項同意書を同封してください。これらが同封されていない、または記入漏れがある場合、解析サービスに着手できませんので、ご注意ください。 2.4 天災、パンデミック、輸送中のサンプル喪失など、弊社の制限を超えた不可抗力に対する補償・保険制度はありませんので、貴重なサンプルをご提供頂く際はご注意ください。 2.5 お預かりできるサンプルは、BSL2（バイオセーフティーレベル2）までのものに限られます。感染性が著しく高いサンプル（HIV, HCV, HBVウイルス）に感染していることが確認されている患者由来の検体など）は、お預かりできませんので、予めご了承ください。ヒト臨床サンプルの場合、インフォームドコンセントを得てからご提供ください。また、動物検疫・国際条約等に該当するサンプルの場合、輸送手続きに日数を要する、又はお取扱いできないことがあります。こうしたサンプルは、弊社提携先にて受け入れが不能、又は拒否されたりする場合があります。 2.6 ご提供頂いたサンプルの返却は致しておりません。（サンプルは解析終了時に破棄されます。） 2.7 サンプル・業務等から生じた知的財産権・工業所有権・安全性・インフォームドコンセント等の問題について、弊社は一切の責任を負わないものとします。 （サンプル、QCシートおよび免責事項同意書のご送付先） 　〒459-8011　名古屋市緑区定納山一丁目1409番地 　フィルジェン株式会社　受託解析部　宛 　Tel: 052-624-4388　Fax: 052-624-4389 3.  キャンセルに関して 本サービスは、海外での解析という性質上、サンプル受領後のキャンセルはお引き受け出来ません。やむを得ない理由でキャンセルされる場合、それまでの工程に応じた料金を請求いたします。 4.  納品物に関して 納品データのバックアップは、必ずお客様にてお取りください。弊社でのデータ保管期間は、発送日から90日間となります。弊社での保管期間を経過したデータは、破棄されます。 5.  その他 上記の記載内容を満たさない事由により別途費用が発生した場合、お客様にそれらの費用のご負担をして頂く場合があります。 ＊本サイトの情報は、LifeCanvas Technologies 社のHomepageの情報を一部引用しております。 【お問合せ】 受託解析部 Phone 052-624-4388 https://filgen.jp/ Copyright (C) 2004-2024 Filgen, Inc.　All Rights Reserved.