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Home製品・サービス情報受託サービス質量分析>HDX-MS タンパク質間相互作用受託解析サービス

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質量分析サービス
HDX-MS タンパク質間相互作用 受託解析サービス

本サービスは、海外業務提携先である Creative Proteomics 社(アメリカ)で実施する水素・重水素交換質量分析(Hydrogen/deuterium exchange mass spectrometry;HDX-MS)です。HDX-MS は、タンパク質の立体構造と立体構造変化、タンパク質間相互作用、タンパク質-ペプチド相互作用、およびタンパク質-低分子相互作用などの研究に使用される強力で重要な解析手法です。


カタログダウンロード(PDF)
 概要

タンパク質の高次構造や構造変化は、バイオ医薬品の有効性に密接に関係しています。そのため、創薬や開発において、タンパク質の高次構造、立体構造、および結合分子間の相互作用をよく理解することは非常に重要です。
HDX-MS は、タンパク質のアミド結合で起こる自然なプロトン交換を利用した質量分析法であり、結合前後のタンパク質における重水素交換速度を比較することで、立体構造変化やタンパク質相互作用領域について知見を得ることが可能な解析サービスとなっております。


特長

本サービスの特長は、以下の点が挙げられます。
・異なる分子量を持つタンパク質を、正確に特徴づけ可能な、高感度・高精度な解析
・バッチ間再現性の高さ
・Orbitrap Exploris
TM 240 質量分析計などを用いた先進的なシステムを採用
・お客様のサンプルの種類、サイズ、解析に応じて、最適な方法をカスタマイズすることが可能
・解析では、3Dモデリングを用いた可視化された解析データをご提供


サービス内容

本解析では、重水素とタンパク質中のアミド水素の交換速度に基づいて構造解析ならびにエピトープ解析を行うことが可能な解析サービスです。単一のタンパクサンプル(Apo)とタンパク質複合体サンプル(Holo)の重水素交換速度を比較します。結合領域では、アミノ酸は重水素への置換が遅いため、これらの複合体形成前後の重水素交換速度を比較することで、タンパク質相互作用領域を検出することができます。また、構造解析において、重水素への交換速度によって、タンパク質の構造・構造変化の解析を行うことが可能です。(例:重水素との交換速度が速い領域は、タンパク質の表面上にあるアミノ酸であり、一方遅い領域はポケット構造を持つ傾向にあります。)

◆HDX-MS 解析ワークフロー

1. 予備検討試験(Feasibility Test)
本解析では、解析の前に予備検討試験を行います。本試験は、結合領域や構造変化解析を行いたいサンプル単体(Apo)、および複合タンパク(Holo)を解析するプレテストです。この時、重水素水とサンプルの反応時間(HDX-Time)は 2 点取得され、Replicate はシングルで測定されます。このテストに合格した場合のみ本解析に移ります。


図 タンパク質 XX および XX+AA 複合体の予備検討試験デモレポートの一部
  (重水素水との反応時間は、1分、60分の2点)

2. サンプル調製
3. 重水素水との反応(HDX time):反応時間は通常30秒、1分、10分のいずれかの1点となります。
  反応時間は、予備検討試験の結果を基にお客様に決めていただきます。構造変化(Kinetic test)を検出したい場合、反応時間を複数点置くこ 
  とが可能です。反応時間を追加する場合、追加料金が発生いたしますこと、予めご了承ください。
4. 低pH(pH2.5)、低温条件(0℃)による Quench
5. 質量分析(1サンプルあたり Triplicate で実施いたします。)
6. データ解析
(納品物)
配列カバレッジを含む Raw data(Excel 形式)
解析レポート(pdf または word 形式)
解析画像ファイル(下記の図をご参照ください)※
3D立体構造解析を御希望の場合は、ご注文時に立体・結晶構造が記載されたPDBファイルをお送りください。利用可能な構造情報がない場合、有償の in silico 解析により、3Dモデルをシュミレーションして解析を行うことも可能なため、ご相談ください。


図 HDX-MS 解析ワークフロー

図 解析に含まれる visualized 解析


必要サンプル条件


必要量・濃度: 3-5mg/ml のタンパク質溶液を 150-200μl ご準備ください。(※1)
バッファー: 解析サンプルは安定した水性バッファーにてご準備ください、(PBS推奨)(※2,3)
サンプルご提供時に解析サンプルの正確なアミノ酸配列情報を FASTA、txt、word にてご提示ください。
エピトープ解析の場合、形成される複合体が安定的であるかご確認ください。(Kd値:μM、nM 推奨)
不安定で解離しやすいことが既知の場合、お問合せ時にご教示ください。カスタム解析にて対応いたします。
溶液でのご提出の場合、ドライアイスと共に弊社までお送りください、粉末の場合、安定状態をお確かめの上、適切な温度にてご送付ください。
※1: 分子量によって必要量が異なる場合がありますので、お問合せの際に分子量をご提示ください。
※2: タンパク質溶液に含まれる不純物 10%未満の溶液をご提出ください。
夾雑物が判明している場合などは、ご相談ください。クマシー染色による不純物の確認を推奨いたします。
※3: プロテアーゼ阻害剤・界面活性剤はバッファーに含めないでください。

(サンプル採取時の注意事項)
タンパク質抽出の際に使用するチューブによっては、PPまたはPEなど、チューブ材質由来のピークが検出され、ペプチドのイオン化を阻害し、データ解析に重大な影響を及ぼす可能性がありますので、ご注意ください。また、過剰にボルテックスなどをかけない様にご注意ください。
タンパク質に界面活性剤など(ポリマー)が多量に残留していると、ポリマーがサンプル由来のペプチドのイオン化を阻害し、データ解析に重大な影響を及ぼす可能性がありますので、ご注意ください。
動物検疫・国際条約等に該当するサンプルの場合、輸送手続きに日数を要する、またはお取り扱いできないことがあります。こうしたサンプルは、弊社提携先にて受入れが不能、または拒否されたりする場合もございますので、事前にお問合せください。


 価格

サービス名 税別価格/サンプル Cat.#
HDX-MS タンパク質間相互作用 受託解析サービス お問合せ F-CPM-HDX-[Apoサンプル数]-[holoサンプル数]
本サービスは、海外業務提携先で実施する解析のため、解析料金の他、サンプルの海外輸送費が別途発生します。
本サービスは、プロジェクト毎に解析費用が異なります。


ご注意事項(必ずご確認ください)

1. 解析サービスに関して
本サービスの解析は、弊社の海外提携先(Creative Proteomics社)にて実施されます。

2. サンプルの送付および取り扱いに関して
2.1 サンプルの発送は、必ず「サンプル送付方法およびご注意点(PDF)」をご参照の上、その内容に従って行ってください。送付の際は、チューブをパラフィルムで覆い、キャップの緩みや中身の漏れが起きない様にしてください。サンプルの入ったチューブには、油性マジックでサンプル名を明記し、ビニールバック等に入れてください。十分量の砕いたトライアイスとともに梱包してください。
2.2 サンプルは、なるべく休日を挟まない様に、弊社営業時間内(土日祝日、年末年始等を除く、平日9時~18時)に到着する様にご発送ください。なお、ご発送時の送料は、お客様負担となります。着払いではお受け取りできませんので、あらかじめご注意ください。
2.3 サンプル送付の際は、受託解析サービスQCシート及び免責事項同意書を同封してください。これらが同封されていない、または記入漏れがある場合、解析サービスに着手できませんので、ご注意ください。
2.4 解析に必要な量が確保できなかった場合、サンプルの再送をお願いする場合があります。なお、再度サンプルをお送り頂く場合、提携先への再送料金をご負担頂きます。
2.5 タンパク質の場合は、凍結状態にして、組織・細胞などの場合はペレット状態にして、十分量のドライアイスを同梱の上、冷凍宅配便にて凍結状態にてご送付ください。
2.6 サンプル喪失時に対する補償・保険制度はありませんので、貴重なサンプルをご提出頂く際は、ご注意ください。
2.7 お預かりできるサンプルは、BSL2(バイオセーフティレベル2)までのものに限られます。感染性が著しく高いサンプル(HIV、HCV、HBVウイルスに感染していることが確認されている患者由来の検体など)は、お預かりできませんので、予めご了承ください。ヒト臨床サンプルの場合、インフォームドコンセントを得てからご提供ください。また、動物検疫・国際条約等に該当するサンプルの場合、輸送手続きに日数を要する、又はお取り扱いできないことがあります。こうしたサンプルは、弊社提携先にて受入れが不能、又は拒否されたりする場合があります。
2.8 ご提供頂いたサンプルの返却は致しておりません。(サンプルは解析終了時に破棄されます。)
2.9 本確認事項を満たさない事で別途費用が発生した場合、お客様に費用のご負担をお願いすることがあります。
2.10 サンプル・業務等から生じた知的財産・工業所有権・安全性・インフォームドコンセント等の問題について、弊社は一切の責任を負わないものとします。

(サンプル、QCシートおよび免責事項同意書の送付先)
フィルジェン株式会社 受託解析部 宛
〒459-8011 名古屋市緑区定納山一丁目1409番地
Phone: 052-624-4388 Fax: 052-624-4389 E-mail: biosupport@filgen.jp

3. キャンセルに関して
本サービスは、海外提携先(Creative Proteomics社)での解析という性質上、サンプル受領後のキャンセルはお引き受けできません。やむを得ない理由でキャンセルされる場合、それまでの工程に応じた料金をご請求させて頂きます。

4. 納品物に関して
納品物は、代理店経由でのお取引の場合、基本的に代理店を介してお送りします。納品データのバックアップは、必ずお客様にてお取りください、弊社でのデータ保管期間は、発送日から90日間です。弊社での保管期間を経過したデータは破棄されます。

お問い合わせ 受託解析部: biosupport@filgen.jp P.052-624-4388 https://filgen.jp/
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